自體CAR-T細(xì)胞療法在血液腫瘤治療中取得了革命性成功，但其制備工藝復(fù)雜，時(shí)間周期長(zhǎng)，治療成本高，還有細(xì)胞因子釋放綜合征（CRS）等副作用風(fēng)險(xiǎn)，高度個(gè)性化，嚴(yán)重制約了可及性和實(shí)際應(yīng)用。體內(nèi)CAR-T細(xì)胞療法則有望成為一種替代方案克服上述挑戰(zhàn)，其利用可以規(guī)模化生產(chǎn)的靶向遞送系統(tǒng)將編碼CAR的遺傳物質(zhì)導(dǎo)入內(nèi)源T細(xì)胞，直接在患者體內(nèi)生成CAR-T細(xì)胞，省去了體外細(xì)胞處理、運(yùn)輸和基于化療的清淋預(yù)處理。

☆ 攜帶整合型載荷的工程化病毒載體，最主要是慢病毒，通過工程化改造病毒包膜蛋白展示識(shí)別T細(xì)胞特異性表面標(biāo)志物的高親和力結(jié)合劑，同時(shí)消除載體與細(xì)胞表面天然受體的互作，實(shí)現(xiàn)對(duì)患者T細(xì)胞的高度選擇性基因轉(zhuǎn)移。這類平臺(tái)可使T細(xì)胞根據(jù)抗原的存在和負(fù)荷，自行調(diào)節(jié)其擴(kuò)增和持續(xù)存在，在需要較高藥效的適應(yīng)癥中可能具有優(yōu)勢(shì)。

☆ 攜帶瞬時(shí)表達(dá)RNA的脂質(zhì)納米顆粒（LNP）,主要通過抗體功能化實(shí)現(xiàn)T細(xì)胞工程化和細(xì)胞靶向，高生物降解性和低反應(yīng)原型的可電離脂質(zhì)則適合于重復(fù)給藥。這類平臺(tái)可以通過調(diào)整給藥方案，相對(duì)獨(dú)立于抗原負(fù)荷來控制暴露，在安全性要求更高的適應(yīng)癥中可能具有優(yōu)勢(shì)。

在體內(nèi)遞送中，抗體的特異性、純度和功能性至關(guān)重要，任何微小的偏差都可能導(dǎo)致脫靶效應(yīng)或激活異常免疫反應(yīng)，來自Bio X Cell的高品質(zhì)抗體已助力多項(xiàng)體內(nèi)CAR-T的LNP遞送研究。如需購(gòu)買美國(guó)Bio X Cell公司產(chǎn)品，請(qǐng)聯(lián)系Bio X Cell授權(quán)代理商兼中國(guó)現(xiàn)貨庫(kù)存中心——欣博盛生物。

Bio X Cell抗體LNP遞送研究案例

長(zhǎng)效體內(nèi)CAR-T結(jié)合IL-6有效沉默

2022年，華東師范大學(xué)化學(xué)與分子工程學(xué)院俞磊與閆志強(qiáng)聯(lián)合團(tuán)隊(duì)發(fā)表研究，構(gòu)建同時(shí)包含CD19-CAR與IL-6 shRNA編碼基因的質(zhì)粒，并將其封裝入LNP，并修飾以Bio X Cell的人CD3抗體（#BE0001-1）作為靶向配體，形成AntiCD3-LNP/CAR19+shIL6。

在注射白血病小鼠后，AntiCD3-LNP顯著富集于淋巴結(jié)/脾臟等淋巴組織，且能穩(wěn)定轉(zhuǎn)染體內(nèi)的T細(xì)胞，將其轉(zhuǎn)化為IL-6低分泌型的CAR-T細(xì)胞。質(zhì)粒DNA載荷實(shí)現(xiàn)了長(zhǎng)達(dá)90天的穩(wěn)定CAR表達(dá)，顯著延長(zhǎng)白血病小鼠的生存，表現(xiàn)出與傳統(tǒng)CAR-T相當(dāng)?shù)目鼓[瘤效果，同時(shí)有效沉默IL-6減少CRS發(fā)生。

2023年底，賓夕法尼亞大學(xué)Michael J. Mitchell教授團(tuán)隊(duì)發(fā)表研究，成功開發(fā)了一種靶向T細(xì)胞的工程化抗體-LNP（Ab-LNP），將針對(duì)不同泛T細(xì)胞標(biāo)志物（CD3、CD5、CD7）的抗體片段連接到 LNP 表面，比較了不同抗體片段的遞送效率、生物分布與功能學(xué)結(jié)果。裝載 CD19 CAR mRNA后，治療組出現(xiàn)了劑量依賴的 CAR 表達(dá)、短期的細(xì)胞因子升高以及對(duì) B 細(xì)胞高達(dá) ~90% 的清除，CD3-LNP 在不同劑量下表現(xiàn)出最-強(qiáng)的遞送。

其中 Bio X Cell 提供的小鼠 CD3?抗體為F(ab)? 形式，省去了酶解切割步驟，直接進(jìn)行還原處理即可獲取與LNP 結(jié)合的片段，為研究提供了極大的便利。